产品背景

Fluoro-Gold^TM  是当今世界上应用最普遍和非常有效的神经逆行示踪剂，  Fluorogold  也称为  羟脒替（  hydroxystilbamidine  ），  是 Fluorochrome, LLC.  公司的专有产品，于  1985  年开始全球范围内销售。

Fluoro-Gold^TM antibody  （抗体）为  Fluorochrome, LLC.  特别开发的高灵敏度抗体，能够大幅度增强  Fluorogold  的可见度。 Fluorochrome, LLC.  公司  1998  年首次引进该抗体以来，不仅大量文献研究证实其有效性，而且成为行业检测的金标准。

产品优势

1  ）  Fluoro-Gold  （荧光金）的产品优势：

极其强效的神经逆行荧光示踪剂，灵敏度高且结果稳定；

不会非特异性结合传代中未损伤的纤维；

不会渗出逆行标记的神经元；

标记神经元存活周期广，  1  天或者高于  1  个月；

可用压力注射或者离子透入（  iontophoresed  ）的方法将染料导入动物体内；

   与最常用的其他几种神经解剖技术相兼容，比如免疫荧光术（  IF  ），免疫细胞化学（  ICC  ），放射自显影技术，过氧化物酶免疫组化（  HRP-IHC  ）  ,  石蜡包埋和其他逆行荧光示踪剂

操作简便安全，保质期长；唯一可靠的材料来源；

Fluoro-Gold  （荧光金）与  Fluoro-Gold  抗体结合使用的优势：

大幅度增强荧光金标记的可视度；

允许更精确的解剖标测

显示相当细微的解剖结构包含树突，轴突和轴突末梢

当与  VECTASTAIN ABC Kit   （  #PK-4000  ，  Vector lab  ）联合使用，可以实现永久染色；

 

产品使用

Fluoro-Gold  （荧光金）单独标记技术

溶解体系（  vehicle  ）：溶于蒸馏水，  0.9%  生理盐水，或溶于  0.2M  中性磷酸盐缓冲液配置成悬浮液

染液浓度：有效染色浓度范围  1-10%  。初次实验推荐使用浓度  4%  。  如果注射部位发生意外坏死，或者标记过于密集，可降低浓度至  2%  。  Fluoro-Gold  分子量为  532.6  daltons  。

注射方法：压力注射；离子透入；或者晶体注入； 

术后存活时间：  好的逆行神经示踪标记一般在术后  2  天  ~2  个月内观察到。通常情况下术后的存活周期是  3~5  天。在染料不会向胞外扩散的前提下存活时间长能够改善远端神经末梢的填充。

固定：  差不多同所有固定方式兼容，或者也可不做固定；常常使用含  4%  甲醛的中性生理缓冲盐作为固定剂。  注：  含高浓度重金属 （如  锇，汞  ）的固定剂会导致荧光淬灭，另外含高浓度（＞  1%  ）戊二醛可能会加深背景荧光；

组化处理：含  Fluoro-Gold  的组织样本几乎与所有通用的组化处理技术兼容，经常使用的是固定组织的冰冻切片（  20 μm  ）。另还包含未固定组织的恒冷切片（  10 μm  ）  ；塑料（  0.2-4 μm  ）或石蜡（  3-10 μm  ）包埋的薄切片；

联合检测：切片进一步处理用于第二种标志物（  marker  ）的检测如放射自显影，  HRP  组化分析；免疫细胞化学；第二种荧光示踪剂；荧光素复染等等。

封片，清洗和盖片：切片通常黏附在明胶包被的载玻片上，风干，二甲苯浸渍，然后加入非荧光的  DPX  塑性封片剂来盖片；

观察与拍照：荧光金可直接用荧光显微镜观察，使用宽带紫外激发滤光片。颜色：中性  pH  缓冲液处理组织发射金色光；酸性  pH  缓冲液（如  pH=3.3  ）处理组织发射蓝色；也可以用数码拍照或者胶片曝光来记录结果。

Fluoro-Gold  （荧光金）  + Fluoro-Gold antibody  （荧光金抗体）的组合标记技术 

抗体特性：  兔多克隆（  100 μl  ，  1:100 dilutionl  ），  BSA diluent (50 mM KPBS, 0.4% Triton, 1% BSA, 1% NGS)  稀释 500~1,000×,  与     Vector elite kit  结合使用大概可做  300~1000  张切片。

抗体使用：荧光金注射入动物体内之后，漂片（以灌注  4%  甲醛的大鼠脑组织切片，  30 μm  为例）在  Fluoro-Gold  抗体工作液中  4 度孵育过夜后，清洗，然后用生物素化  GAR  （  Biotinylated Goat Anti-Rabbit IgG Antibody     ，  1:1000  ，  Cat#  ：  BA-1000  ）室温孵育  1h  ，之后清洗。  切片再用  Avidin/Biotin  （  1:1000  ，  vector  ，  Cat#:PK6100  ）孵育  1h  ，之后转入  DAB  显色底物孵育  6 mins  （ Diaminobenzidine (.04%) and Nickel Chloride (2.5%) in 0.1 M NaAcetate with 0.06% H₂O₂  ）。切片最后进行清洗，组织黏合，干燥，脱水和盖片。