使用 Thermo Scientific NEPER核蛋白 -胞浆蛋白抽提试剂盒可以在两小时以内分别抽提出胞浆和核蛋白组份。该方法是微量离心管方法，主要步骤包括首先用含有专利去垢剂的低渗缓冲液裂解细胞，然后微量离心以便沉淀完整的细胞核，此后去除胞浆组分，最终裂解细胞核。一般使用该方法所得的细胞质与细胞核组分之间的交叉污染 <10%。一般从 2x10 ⁶个细胞中能够抽提出胞浆蛋白 200-500μ g，细胞核蛋白 100-200μ g（浓度 >1mg/ml）。可以通过改变抽提中所用的核抽提试剂 (NER)的量而调整所需要的蛋白浓度而不会影响抽提效率。

从细胞中专一地抽提核蛋白是许多基因调节研究中成功的关键因素。然而目前大多数分离细胞核、制备核蛋白抽提物的方法需时很长并且需要机械匀浆、反复冻融、超速离心或者透析等步骤，而这些步骤很可能会影响到许多脆弱的核蛋白的完整性。 NE-PER*试剂盒解决了这些问题，可以得到高质量浓缩的核蛋白抽提物，所得的抽提物可用于 EMSA及其它分析技术。

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产品特点：

快速 – 在两小时以内获得核组分和胞浆组分。

简单 – 使用台式微量离心机和微量离心管方法，因此不需要繁琐的反复冻融、杜恩斯匀浆、长时间的离心以及低温试验。

通用 – 从同一个组织或细胞样品中即可分别获得其细胞核和细胞质抽提物。

相容性强 – 抽提物可用于蛋白免疫印迹、凝胶阻滞分析、蛋白定量分析、报告基因分析以及酶活性分析等下游应用。

利用 Thermo Scientific NE-PER核蛋白 -胞浆蛋白抽提试剂盒从多种哺乳动物细胞系中制备的胞浆组分和核组份的蛋白量。 利用 Thermo Scientific BCA微量蛋白定量分析试剂盒 (产品货号 23235)进行蛋白定量。显示的数值为两次单独分离的平均值。

对 HeLa细胞的胞浆及核组分进行蛋白免疫印迹分析，结果显示交叉污染极少。 利用 4-20% 梯度 Tris－甘氨酸变性凝胶对总蛋白量 (20μ g)相等的四种样品进行电泳。将蛋白转移到醋酸纤维素膜上，用含有 3%BSA的 Tris缓冲液进行封闭。 A. 用抗 Oct-1的抗血清 (1:400)进行结合，然后利用 1:100,000的标记辣根过氧化物酶的二抗进行结合。 B. 用抗 hsp90的抗血清 (1:400)进行结合，然后利用 1:50,000的标记辣根过氧化物酶的二抗进行结合。两个分析所用的底物均为用于蛋白免疫印迹的 SuperSignal皮克级化学发光底物 (产品货号 34080)。

参考文献

Corless,M.,et al.(2006).J. Endocrinol. 190,719-727.

Gomes, D.A.,et al.(2008). J. Biol. Chem. 2834344-4351.

Lecanda, J.,et al.(2007).Cancer Res. 67, 1007-1018.

Liu, O.,et al. (2007). FASEB J.  21,61-73.

Smirnova, I.V.,et al. (2000).J. Biol. Chem. 275(13), 9377-9384.

Yamada, N.A. and Farber, R.A. (2002).Cancer Research 62, 6061-6064.

Yamada, N.A.et al. (2003).Mutagenesis 18(3), 277-282.
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